产品货号：
JN5025
中文名称：
甲基化分析qPCR SuperMix
英文名称：
2×BalbStart MethyLight qPCR SuperMix
产品规格：
5mL
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本制品是通过荧光定量PCR法来检测DNA的甲基化。在本制品中添加了经过特殊工艺处理的Taq DNA聚合酶、Mg2+、dNTPs、PCR稳定剂和增强剂等，组成一种2×浓度的预混型试剂，可以对DNA模板进行定量或半定量的甲基化分析，进行表观遗传学研究。
亚硫酸氢盐处理DNA模板后，甲基化的CpG序列仍然保持CpG序列形式，未甲基化的CpG序列会转变为UpG序列。然后针对CpG和UpG所在的片段设计两对引物，进行qPCR，通过比对Ct值来确定甲基化水平。或者，只设计一对针对甲基化CpG片段的引物进行半定量分析。
该产品可应用于表观遗传学的研究，主要涉及肿瘤，干细胞和器官发育等。特别是在癌基因检测方面有着很好的应用。
- 特异性强：采用特殊工艺制造的HotStart Taq DNA聚合酶，可以进行热启动PCR反应，大大提高了PCR扩增的特异性。
- 高效扩增：精心配制的Real-Time PCR专用2×SuperMix，具有较高的扩增效率和灵敏度。
- 快捷：PCR反应所需试剂集于一管之中，只需添加引物、探针即可完成反应体系配置。
| 组分 | 规格 |
| 2×MethyLight qPCR SuperMix | 1mL×5 |
| RNase-Free Water | 1mL×5 |
| ROX I | 200μL |
| ROX II | 200μL |
保存：-20℃
使用时请上下颠倒轻轻均匀混合，避免起泡，并经轻微离心后使用。反应液的配制、分装请使用新的（无污染的）枪头、Microtube等，避免污染。
- 常用反应体系
成分 用量 2×MethyLight qPCR SuperMix 12.5μL 上游引物 0.2～1.0μM(终浓度) 下游引物 0.2～1.0μM(终浓度) 探针(10μM) 0.5μL 模板 1～2μL (10ng～1μg) ROX(需根据机器型号选择) 0.5μL RNase-Free Water 至25μL - 常用PCR反应程序：
- 两步法：
反应阶段 温度 时间 循环数 预变性 95℃ 10min 1 变性 95℃ 20s 35～45 退火/延伸 60℃ 30～60s - 三步法：
反应阶段 温度 时间 循环数 预变性 95℃ 10min 1 变性 95℃ 20s 35～45 退火 50～60℃ 20s 延伸 72℃ 30s
- 两步法：
- 用ROX I校准的Real Time PCR仪有：
ABI：5700/7000/7300/7700/7900/7900 HT/7900 HT Fast/StepOne/StepOnePlus及其他仪器。 - 用ROX II校准的Real Time PCR仪有：
ABI：7500/7500 Fast/ViiA7/QuantStudio 3,5,6 Flex,7 Flex,12k Flex；
Stratagene：MX4000/MX3005P/MX3000P及其他仪器。 - 不需要用ROX校准的Real Time PCR仪有：
Bio-Rad：CFX96/CFX384/iCycler iQ/iQ5/MyiQ/MiniOpticon/Opticon/Opticon2/Chromo4；
Eppendorf：MasterCycler ep realplex/realplex 2s；
Cepheid：SmartCycler；
Illumina：Eco qPCR；
Roche Applied Science：LightCycler480/LightCycler2.0/Lightcycler96；
Thermo Scientific：PikoReal Cycler；
Qiagen：Corbett Rotor-Gene Q/Rotor-Gene 3000/Rotor-Gene 6000及其他仪器。
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